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NGS引物

继qPCR技术成为分子诊断的主流技术平台后,第二代测序(NGS)技术的迅速发展给予了科学研究和医学诊断领域更高的技术平台及更广阔的发挥空间。作为NGS应用的重要原料组成,NGS引物和常规PCR引物相比,对于纯度、定量精确度、碱基序列准确性及交叉污染率提出了更高的要求。生工生物拥有二十多年引物合成经验,我们针对NGS应用优化产品性能和质量,并提供全面的质量检测。我们同样拥有先进的NGS技术平台,能对NGS引物的交叉污染率进行检测。

NGS实验流程包含样品制备(核酸抽提/核酸制备)、文库构建、上机测序和生物信息学分析几个步骤。NGS相关引物主要体现在文库构建的步骤中。其中,全基因组测序仅需要进行片段化和加接头的文库构建步骤,而全外显子组测序和目标区域捕获测序除了文库构建的步骤还需要目标区域捕获的步骤。

< style="text-align: center;margin-bottom:15px;">
类型 NGS引物名称
目标区域捕获 1接头引物
2杂交捕获探针
3多重PCR引物
4封阻引物(Blocker)

在线订购 在线引物设计

我们的优势

  1.  优选合成原料,优化生产流程,确保极低的碱基错误率;
  2.   NGS接头引物交叉污染率<0.05%
  3.  关键质量指标动态批次间差异控制;
  4.  建立周期性质量跟踪体系并定期出具质量跟踪报告。

订购信息

  文库构建

< style="background:#EDEDED;font-weight: bold;line-height: 21px;padding:10px 0;padding-left:20px;margin-bottom:10px;font-size: 14px;;">

NGS接头引物

NGS Adaptor Primer

接头的本质是一段短的碱基序列,基本包括三个部分:与flow-cell上面寡核苷酸相同或互补的片段P5/P7;测序时测序引物结合部分R1/R2;用于区分不同样本的Index。接头是待测DNA片段与Flow-cell连接的桥梁,目的片段连接接头后可以在flow cell上扩增再测序。生工生物可以按您的要求定制各种不同类型的接头引物,并可提供独立单链、双链混合和双链退火三种不同形式分装的接头引物。

纯化方式 碱基范围 交付形态 包装形式 额外QC 合成周期
NGS 接头引物单链
HPLC_CE (IVD) 15~80 mer 干粉
液体
管装
96孔板
384孔板
纯度(CE) 咨询
NGS 接头引物双链预混(不退火)
HPLC_CE (IVD) 15~80 mer 干粉
液体
管装
96孔板
384孔板
纯度(CE) 咨询
NGS 接头引物双链预混退火
HPLC_CE (IVD) 15~80 mer 干粉
液体
管装
96孔板
384孔板
纯度(CE) 咨询

  目标区域捕获

< style="background:#EDEDED;font-weight: bold;line-height: 21px;padding:10px 0;padding-left:20px;margin-bottom:10px;font-size: 14px;;">

杂交捕获探针

Hybrid Capture Probes

杂交捕获根据核酸分子碱基互补杂交原理,设计分子探针。探针可以和目标区域通过碱基互补配对结合,从而将目标区段捕获。未设计探针的区段会被洗脱丢弃,之后通过变性将探针和捕获区段分开,被捕获的片段即可进行二代测序。杂交捕获探针通常会以预混引物池的形式交付。生工生物可提供常规合成引物池探针(≤10,000条)和芯片合成引物池探针(≥2,000条)。

纯化方式 碱基范围 交付形态 包装形式 额外QC 合成周期
杂交捕获探针单管合成
HPLC
HPLC_CE (IVD)
80~120 mer 干粉
液体
管装
96孔板
384孔板
纯度(CE) 咨询
杂交捕获探针常规合成引物池(条数3~10,000条)
HPLC
HPLC_CE (IVD)
80~120 mer 干粉
液体
管装
96孔板
384孔板
- 咨询
Twist®*杂交捕获探针芯片合成引物池(条数≥2,000条)
无需纯化** 80~120 mer 液体 管装 - 咨询

备注:

*Twist属于美国Twist Bioscience注册商标,此项技术平台来源美国Twist Bioscienc提供的专利芯片Probe 合成技术平台; **由于芯片合成每条Oligo均在独立的微反应器中合成,所以本身就是一种物理分隔,加上合成的准确度很高,QC也会对纯度进行检测,故无需额外纯化。

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多重PCR引物

Multiplex PCR Primers

通过多重PCR的方法来进行目标区域捕获适合大规模的样本和少片段/位点的富集。和杂交探针捕获的方法比,常规情况下,多重PCR的费用也更加经济。

纯化方式 碱基范围 交付形态 包装形式 额外QC 合成周期
多重PCR引物单管合成
不限 15~120 mer 干粉
液体
管装
96孔板
384孔板
纯度(CE) 咨询
多重PCR引物常规合成引物池(条数≤10,000条)
不限 15~120 mer 干粉
液体
管装
96孔板
384孔板
- 咨询
< style="background:#EDEDED;font-weight: bold;line-height: 21px;padding:10px 0;padding-left:20px;margin-bottom:10px;font-size: 14px;;">

封阻引物(Blocker)

Blocker Primers

NGS Blocker引物通常用于捕获建库过程中阻止文库接头的杂交,提高捕获测序的特异性。生工生物提供定制Blocker引物,并可出具包含纯度、分子量等信息的检测报告。

纯化方式 碱基范围 交付形态 包装形式 额外QC 合成周期
HPLC ~ 干粉
液体
管装
96孔板
384孔板
纯度(CE) 咨询

质量控制

  质谱检测(MS):确保极低的碱基错误率

< style="text-align: center;margin-bottom:15px;">

分子量质谱检测实例

测试引物理论分子量为8052.67。通过质谱检测,实测分子量为8052.5,分子量误差经计算为-0.002%,

小于质控标准±0.05%。测试引物质谱检测合格,碱基序列的正确性在质量可控制范围之内。

  交叉污染率(CCR):NGS接头引物使用 HPLC_CE(IVD) 作为纯化方式,交叉污染率<0.05%,使用HPLC作为纯化方式,交叉污染率<0.1%

< style="text-align: center;margin-bottom:40px;">

2019年Q1~2020年Q2季度NGS接头引物交叉污染率抽样检测

检测高通量接头/引物合成制备过程中的交叉污染,将index引物建好文库,进行高通量测序,

计算不同组合的序列频数。根据频数计算每一条index引物的交叉污染概率

资源

文档下载
引物合成线下订购表(128 KB) 引物定制合成手册(1.84 MB)
工业产品手册(7.17 MB) 引物使用说明书(1 MB)
修饰基团说明手册(4 MB)

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